什么是LightCycler 480 II 实时荧光定量PCR仪

LightCycler 480 II 实时荧光定量PCR仪（Roche Diagnostics）

一、设备概述

LightCycler 480 II 是 Roche Diagnostics 研发的一款高通量、全自动实时荧光定量PCR（qPCR）仪器。该设备采用创新的热循环技术，结合先进的荧光检测系统，能够显著提高实验效率，同时确保高精度和高重复性的检测结果。LightCycler 480 II 适用于基因表达分析、基因分型、突变检测、病原体检测等多种应用，特别适合需要高精度定量和大规模实验的研究需求。

二、主要特点

1. 高通量支持

LightCycler 480 II 支持 96 孔板和384 孔板两种格式，满足不同实验通量的需求。高通量能力使其特别适用于大规模基因筛选和临床样本检测。

2. 创新的热循环技术

该设备采用高效的银合金模块，确保热传递的均匀性和快速升降温能力。温度均匀性对于PCR反应的准确性至关重要，LightCycler 480 II 通过优化热循环系统，确保实验的高精度和重复性。

3. 多通道荧光检测

LightCycler 480 II 具备 5 个荧光检测通道，能够同时检测多种荧光染料，包括 SYBR Green、TaqMan 探针等。其灵敏的光学系统能够高效检测荧光信号，使得多重PCR（Multiplex PCR）成为可能，大幅提高实验效率。

4. 精确的定量分析

LightCycler 480 II 能够进行绝对定量、相对定量、基因分型、溶解曲线分析等实验，适用于多种研究领域。其强大的数据分析软件支持标准曲线法、ΔΔCt 法等不同定量分析方法，确保数据的可靠性。

5. 直观的软件界面

配套的 LightCycler 软件提供直观的操作界面，可实现实时数据采集、扩增曲线分析、基因分型等功能。该软件还能自动生成实验报告，简化数据管理流程。

6. 适应不同的实验需求

LightCycler 480 II 兼容多种荧光探针、染料和 PCR 反应体系，能够灵活适应不同的实验需求，如：

• 基因表达分析

• 基因分型

• 突变检测

• 病原体检测

• 药物筛选

三、应用领域

1. 基因表达分析

LightCycler 480 II 通过实时荧光检测，精准量化基因表达水平，适用于研究细胞信号通路、疾病机制及药物作用。

2. 基因分型

该设备可用于 SNP（单核苷酸多态性）检测和等位基因分型，广泛应用于遗传学研究和个性化医学领域。

3. 突变检测

可用于检测肿瘤相关基因突变、病毒变异株等。高灵敏度的荧光检测系统确保微量突变的准确识别。

4. 病原体检测

LightCycler 480 II 可用于检测病毒、细菌和其他病原微生物，特别适用于临床诊断和公共卫生监测。

5. 药物筛选

可用于筛选影响基因表达的候选药物，评估药物的作用机制。

四、操作流程

1. 样本准备

• 提取 DNA/RNA

• 进行逆转录（如 RNA 需要转录为 cDNA）

2. PCR 反应体系配置

• 添加 PCR 反应缓冲液、荧光探针/染料、酶、引物等

• 配置标准曲线（如需要）

3. 装载样本

• 使用 96 孔或 384 孔 PCR 板

• 进行密封，防止蒸发

4. 设置 PCR 程序

• 配置扩增步骤，如变性、退火、延伸等

• 选择检测通道和数据采集模式

5. 运行 PCR 反应

• 启动 LightCycler 480 II

• 实时监测荧光信号，记录扩增曲线

6. 数据分析

• 生成扩增曲线、标准曲线、Ct 值分析等

• 输出实验报告

五、维护与保养

为了保持 LightCycler 480 II 的最佳性能，建议定期进行以下维护：

1. 清洁光学组件

• 使用适当的清洁溶剂擦拭检测模块，避免灰尘影响荧光检测。

2. 温控系统校准

• 定期进行温度均一性测试，确保加热模块工作正常。

3. 软件升级

• 确保 LightCycler 软件版本最新，以获得最新的数据分析功能。

4. 日常检查

• 运行空白实验，确保仪器没有背景荧光污染。

六、技术参数一览

七、总结

LightCycler 480 II 是一款高通量、高精度的实时荧光定量 PCR 仪器，特别适用于需要进行大规模样本分析的实验室。其先进的热循环技术、灵敏的荧光检测系统和直观的软件操作界面，使其成为分子生物学研究、临床诊断和药物筛选等领域的重要工具。无论是基因表达分析、基因分型，还是病原体检测，LightCycler 480 II 都能提供可靠的实验结果，为科学研究和医疗应用提供有力支持